基因工程基本原理：一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取，克隆基因载体的选择与改造，目的基因与载体的连接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞. 张博士医考|搜集整理。实现上述过程需要一些重要的工具酶，如限制性内切核酸酶连接酶等 限制性内切核酸酶是一类识别DNA特意序列的内切核酸酶张博|士医考搜集整理。 .

　　一、目的基因的获取：

　　外源基因又称目的基因，来源于几种途径：化学合成、酶促合成cDNA，制备的基因组DNA及PCR技术 细菌质粒、噬菌体和一些病毒DNA均可被改造成基因克隆的载体张博士|医考搜集整理。 .

　　二、基因载体的选择与构建：

　　可作为基因载体的DNA分子有质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA，它们经适当改造后仍具有自我复制能力，或兼有表达外源基因的能力

　　三、外源基因与载体的连接：

　　连接方式有：黏性末端连接、平端连接和人工接头连接等张博士|医考搜集整理。 张博|士医考整理。

　　四、重组DNA导入宿主细胞：

　　外源DNA与载体在体外连接成重组DNA分子，需将其导入宿主细胞 随受体细胞生长、增殖，重组DNA分子得以复制、扩增. .

　　五、重组体的筛选：

　　鉴定哪一菌落或嗜菌斑所含重组DNA分子确实带有目的基因，即可得到目的基因的克隆，这一过程即为筛选或选择

　　六、克隆基因的表达：

　　在原核或真核表达体系中进行表达，获得所需要的蛋白质张博|士医考搜集整理。 张|博士医考搜集整理。