北京张博士医考公卫执业医师辅导资料— HLA的三种分型技术

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免疫遗传学研究的发展，很大程度上依赖于以分型为主要手段的HLA多态性分析。北京张博士医考的小编整理了HLA的三种分型技术，希望对考生有所帮助。

1.血清学分型技术：

1）HLA-Ⅰ类抗原的检测

HLA-A、B、C抗原型别鉴定均借助微量淋巴细胞毒试验或称补体依赖的细胞毒试验。原理为取已知HLA抗血清加入待测外周血淋巴细胞，作用后加入 免补体，充分作用后加入染料，在倒置显微镜下判断结果，着染的细胞为死亡细胞，表示待检淋巴细胞表面具有已知抗血清所针对的抗原。标准抗原清取自多次经产 妇或计划免疫志愿者。

2）HLA-DR、DQ抗原检测

该二抗原分型方法与HLA-Ⅰ类抗原相同，但所用抗血清须经过血小板吸收以去除针对Ⅰ类抗原的抗体。另外，待测细胞须是经纯化的B细胞。

2.细胞学分型技术：

HLA-Dw特异性与HLA-DP特异性可分别通过纯合分型细胞及预致敏淋巴细胞试验检测。二种方法的基本原理均是判断淋巴细胞在识别非已HLA抗原决定簇后发生的增殖反应。由于分型细胞来源困难以及操作手续繁琐，细胞学分型技术下正逐渐淘汰。

3.HLA的DNA分型技术

1）限制性片段长度多态性检测技术

这是首先建立的对多态性进行检测的DNA分析技术。个体间抗原特异性来自氨基酸顺序的差别，后者由编码基因的碱基顺序不同所决定。这种碱基顺序的差 别造成限制性内切酶识位置及酶切位点数目的不同，从而产生数量和长度不一的DNA酶切片段。用特异性探针对整个基因组DNA酶切片段进行杂交，即可分析限 制性长度片段多态性。一定的内切酶组合所得到的HLA-RFLP可以和传统方法测定的HLA特异性型别相关。80年代末发展起来的PCR技术已被用于 RFLP分析，即用等位特异限制酶裂解PCR扩增的片段，然后再进行分析，从而大提高了灵敏度。

2）PCR/SSO技术

此法乃用人工合成的HLA型别特异的寡核苷酸序列作为探针，与待检细胞经PCR扩增的HLA基因片段杂交，从而确定HLA型别，PCR技术可将 HLA复合体上指定基因片段特异性地扩增5～6个数量级；而专门设计的SSO探针又能探测出等位基因间1～2个核苷酸的差异，故PCR/SSO技术具有灵 敏度、特异性强、需样本量少等优点。

3）PCR/SSP技术

目前常规的HLA-DNA分型技术，包括上述的PCR/RFLP、PCR/SSO等，最终均需用标记的特性探针与扩增产物进行杂交，再分析结果。 PCR/SSP方法用乃设计出一整套等位基因组特异性引物，借助PCR技术获得HLA型别特异的扩增产物，可通过电泳直接分析带型决定HLA型别，从而大 大简化了实验步骤。

由于传统方法在Ⅱ类抗原分型方面困难较大，故上述几种基因分析型方法目前主要用于Ⅱ类基因座。此外，目前已建立的HLA基因分型技术还包括PCR单 链构像多态性分析和PCR 异源二聚体电泳多态即PCR指纹图分析。DNA分型技术的应用，使HLA型别分析达到了更精细的水平，并因此发现了更多的HLA多态性。HLA的DNA分 型技术现已成为血清学方法的竞争者，并可能在不久的将来完全取而代之。

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