北京张博士医考初级药师考试辅导之——DNA 变性| 应用| 概念
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DNA 变性及其应用一、DNA 变性和复性的概念在极端的pH值(加酸或碱)和
受热条件下,DNA 分子中双链间的氢键断裂,双螺旋结构解开,这就是DNA 的变
性。依变性因素不同,有DNA 的酸、碱变性,或DNA 的热变性之分。因为变性时
碱基对之间的氢键断开,相邻碱基对之间的堆积力也受到破坏(但不伴有共价键
断裂),所以变性后的DNA 在260nm 的紫外光吸收增强,称为高色效应。在DNA
变性中以DNA 的热变性意义最大。DNA 的热变性又称DNA 的解链或融解作用。在
DNA 热变性过程中,使紫外吸收达到最大增值50% 时的温度称为解链温度,又称
融解温度Tm)。Tm与DNA 分子G+C 量有关。北京张博士医考搜索整理,请参
考。
热变性的DNA 溶液经缓慢冷却,两条解链的互补单链重新缔合,恢复双螺旋
结构,即退火。变性DNA 经退火恢复原状的过程称变性DNA 的复性。伴随复性,
DNA 溶液紫外吸收减弱,称低色效应。
二、核酸杂交复性是指核酸双链分子中分开的两股单链重新结合。如果将不
同的DNA 链放在同一溶液中作变性处理,或将单链DNA 与RNA 放在一起,只要某
些区域(或链的大部分)有形成碱基配对的可能,它们之间就可形成局部双链,
这一过程称为核酸杂交,生成的双链称为杂化双链。核酸杂交技术是目前研究核
酸结构、功能常用的手段之一。
三、核酸探针在核酸杂交基础上发展起来的一种用于核酸研究和诊断的新技
术称核酸探针技术。一小段(例如十数个至数百个)核苷酸聚合体的单链,用放
射性核素如32P 、35S 或生物素等化学发光物质标记其末端或全链,就可作为探
针,将待测DNA 变性并吸附在适当支持物(如硝酸纤维素膜)上,然后将支持物
与含探针的溶液共同温育,使发生杂交。带有特殊标记的探针若能与待测DNA 结
合成杂交双链,则保留在支持物(或称固相载体)上。通过核素放射自显影或生
物素的化学显色,就可判断探针是否与被测的DNA 发生了杂交。此为固相杂交,
应用较广。另外还有液相杂交。张博士医考论坛bbs.guojiayikao.com 探针技术
在遗传性疾病等的诊断上有广泛应用。例如诊断地中海贫血或血红蛋白病等分子
病,可以由已确诊的病人白细胞中提取DNA ,进行DNA 诊断。北京张博士医考中
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